Presentations -
-
70％部分肝切除ラットにおけるプロスタグランジンE2の肝再生促進作用に関する組織化学的研究
内藤 浩太、北澤 知英、茂木 肇、木村 光利、荻原 政彦
第58回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2014.10
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：昭和薬科大学
【目的】当研究室では、肝再生現象のin vitroモデル系としての初代培養肝実質細胞を用いて、肝再生を促進する薬物の探索を行ってきた。その一連の研究の中で、プロスタグランジンE₂(PGE₂)について検討したところ、我々は、PGE₂が単独で肝実質細胞の増殖を促進させることを見出した。そこで、本研究では、in vivo実験系である70%部分肝切除ラットにおいて、PGE₂による肝再生促進作用を検討するため、DNA合成期(S期)の核に特異的に取り込まれた5-bromo-2'-deoxyuridine(BrdU)を免疫組織化学的手法により測定することにより、DNA合成能に対するPGE₂の効果を評価した。
【方法】ラット(Wistar系、雄性)にエーテル麻酔下で70%部分肝切除術を施行し、術直後より、PGE₂を1日1回腹腔内投与した。術後、一定期間経過したモデル動物にBrdU(50
mg/kg,i.p.)を投与し、肝重量を測定した。その後、摘出した残余肝臓は、ホルマリン固定、パラフィン包埋した後、ミクロトームにより薄切して組織切片を作成した。S期の核に取り込まれたBrdUは、BrdU Inmunohistochemistry Kit(Exalpha Blologlcals)により染色し、その染色された割合(Labeling Index;LI)を計測した。
【結果及び考察】70%部分肝切除ラットに対して、PGE₂(10 μg/kg,i.p.)投与群では術後3日目においてcontrol(0.2%エタノール)群と比較すると有意な肝重量の増加が認められた。一方、DNA合成能の変動は、術後1日目において一過性のピークが認められ、術後1日目のLIは、control群が9.8%であったのに対し、PGE₂(10 μg/kg,i.p.)投与群は22.5%とDNA合成能の有意な上昇を示した。以上の結果より、PGE₂は、70%部分肝切除ラットにおいて、術後早期から肝実質細胞のDNA合成能を有意に上昇させ、肝再生を促進することが示された。 -
Vitamin C induced cell proliferation in primay cultures of adult rat hepatocytes : The involvement of insulin-like growth factor-I recepter.
Event date： 2014.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
70％部分肝切除マウスにおけるS-Allyl-L-Cysteineの肝再生促進作用の検討
鎌苅 紗綾、茂木 肇、木村 光利、荻原 政彦
第57回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2013.10
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：帝京大学板橋キャンパス
【目的】当研究室では、従来から肝再生現象のin vivoモデル系として、70%部分肝切除ラットを用いて、肝再生を促す薬物の探索などを行ってきた。一連の研究の中で、水溶性含硫アミノ酸であるS-Allyl-L-Cysteine(ACys)に注目した。近年、ACysが神経細胞や表皮細胞などの増殖に関与していることが報告されている。そこで、本研究では、in vivo実験系の70%部分肝切除マウスを用いてACysによる肝再生促進作用を検討した。
【方法】マウス（ddY系、雄性）に70％部分肝切除術を施行し、術直後より、ACysを1日1回腹腔内投与して、術後1-5日目における肝臓の再生割合をcontrol（生理食塩水）群と比較した。また、マウスの門脈より採血し、血清トランスアミナーゼ（AST、ALT）活性値も測定した。【結果及び考察】70％部分肝切除後の肝重量の経時的変化において、control群は術後1日目から肝重量が増加し始め、術後5日目には切除前の元の肝重量にまで回復した。ACys群では、control群よりも早期に肝重量の増加が見受けられ、術後4日目におけるマウス体重10ｇあたりの肝重量は、control群0.36 gであるのに対し、ACys群は0.43 gと、ACys投与により、術後4日目で切除前の元の肝重量まで回復した。一方、ACys投与における70％部分肝切除マウスの血清AST及びALT活性は、共にcontrol群と大きな差は認められなかった。これらの結果により、ACysは、70%部分肝切除マウスの肝重量を、術後早期から有意に増加させたことから、肝再生を促進させることが示された。 -
アスコルビン酸2グルコシドのラット初代培養肝実質細胞増殖促進作用に対するアドレナリン作動性調節機構の検討
浅見 和希、茂木 肇、木村 光利、荻原 政彦
第57回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2013.10
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：帝京大学板橋キャンパス
【目的】当研究室では、アドレナリン受容体作動薬と増殖因子(肝細胞増殖因子など）との受容体を介するシグナル伝達系との関連(cross-talk)について、成熟ラット初代培養肝実質細胞系を用いて検討してきた。その結果、α1およびβ2作動薬は、単独では、肝実質細胞の増殖に影響を与えないが、増殖因子との共存下で、増殖因子の増殖促進作用を増強させることを見出した。一方、我々は、L-アスコルビン酸2グルコシド(AsA2G)が、IGF-I受容体を介して、肝実質細胞の増殖を促進させることも見出した。そこで、今回アドレナリン受容体作動薬が、AsA2Gによる肝実質細胞増殖促進作用にどのような影響を及ぼすのかを検討した。
【方法】in situコラゲナーゼ還流法により、成熟ラットから肝実質細胞を単離し、初代培養を行った。細胞接着後、無血清培地に交換し、種々の濃度のAsA2G及び特異的シグナル伝達因子阻害薬を添加した。培養終了後、肝実質細胞のDNA合成能及び核数を計測した。
【結果および考察】初代培養肝実質細胞をAsA2G単独で刺激すると、培養時間に依存して肝実質細胞のDNA合成能および核数の増加が認められた。更に、このAsA2Gにより誘発された肝実質細胞のDNA合成能および核数の増加は、α1またはβ2作動薬の共存下で増強された。一方、α1およびβ2作動薬は、単独では肝実質細胞のDNA合成能および核数に影響を及ぼさなかった。これらの結果から、AsA2Gによる肝実質細胞増殖促進作用は、α1およびβ2作動薬により増強されることが示された。 -
ラット初代培養肝実質細胞におけるアスコルビン酸2グルコシドのMAPキナーゼ活性に対するアドレナリン作動性調節機構の検討
大沼 弘和、茂木 肇、木村 光利、荻原 政彦
第57回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2013.10
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：帝京大学板橋キャンパス
【目的】当研究室では、アドレナリン受容体作動薬と増殖因子(肝細胞増殖因子など）の受容体を介するシグナル伝達系との関連(cross-talk)について、成熟ラット初代培養肝実質細胞系を用いて検討してきた。その結果、α1及びβ2 作動薬は、単独では、肝実質細胞の増殖に影響を与えないが、増殖因子との共存下で、増殖因子の増殖促進作用を増強させることを見出した。一方、我々は、L-アスコルビン酸2グルコシド(AsA2G)が、IGF-I受容体を介して、肝実質細胞の増殖を促進させることも見出した。そこで、α1及びβ受容体を介する肝実質細胞増殖修飾作用が、AsA2Gのシグナル伝達機構のどの部分と相互作用をしているのかを、IGF-I受容体チロシンキナーゼ（IGF-I-RTK）およびMAPキナーゼ(MAPK;ERK1/ERK2)の活性を直接測定することにより、検討した。
【方法】AsA2Gとα1及びβ2作動薬との共存下における初代培養肝実質細胞のIGF-I-RTK及びMAPK活性を、抗リン酸化IGF-I-RTK、ERK1/ERK2抗体を用いたWestern blot 解析法にて測定し、そのリン酸化活性を比較検討した。
【結果および考察】初代培養肝実質細胞をAsA2G単独で刺激すると、培養開始3～5分でピークとなる一過性のIGF-I-RTKおよびERK2リン酸化活性の上昇が発現した。更にERK2リン酸化活性はα1及びβ2作動薬の共存下で増強された。これらの結果から、肝実質細胞におけるAsAの肝実質細胞増殖促進シグナルは、IGF-I-RTKの下流からERK2の上流の間でα1及びβ2アドレナリン作動性増強を受けていることが示された。 -
70%部分肝切除マウスにおけるロイシンの肝再生促進作用の検討
阿部 拓也、茂木 肇、木村 光利、荻原 政彦
第57日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2013.10
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：帝京大学板橋キャンパス
【目的】当研究室では、従来から肝再生現象のin vivoモデル系として、70%部分肝切除ラットを用いて、肝再生を促す薬物の探索などを行ってきた。一連の研究の中で、分岐鎖アミノ酸の一つであるロイシン（Leu）に注目した。我々は、Leuによる肝実質細胞の増殖促進作用を、初代培養肝実質細胞を用いたin vitro実験系で証明した。そこで、本研究では、in vivo実験系の70%部分肝切除マウスを用いて、Leuによる肝再生促進作用の有無を検討した。
【方法】マウス（ddY系、雄性）に70％部分肝切除術を施行し、術直後より、Leuを1日1回腹腔内投与して、術後1-5日目における肝臓の再生割合をcontrol（生理食塩水投与）群と比較した。また、マウスの門脈より採血し、血清トランスアミナーゼ（AST、ALT）活性値も測定した。
【結果および考察】70％部分肝切除後の肝重量の経時的変化において、control群は術後1日目から肝重量が増加し始め、術後5日目には切除前の元の肝重量にまで回復した。これに対し、Leu投与群では、control群よりも早期に肝重量の増加が見受けられ、術後4日目におけるマウス体重10ｇあたりの肝重量は、control群0.38 gであるのに対し、Leu投与群は0.45 gと、Leu投与により、術後4日目で切除前の元の肝重量まで回復した。一方、Leu投与における70％部分肝切除マウスの血清トランスアミナーゼ活性は、術後2日目においてAST、ALT共に有意な低下が認められた。これらの結果により、Leuは、70%部分肝切除マウスの肝重量を術後早期から有意に増加させ、合わせて肝機能も早期に改善させることが示された。 -
70％部分肝切除マウスにおけるアスコルビン酸2グルコシドの肝再生促進作用の検討
大橋 愛、茂木 肇、木村 光利、荻原 政彦
第57回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2013.10
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：帝京大学板橋キャンパス
【目的】当研究室では、従来から肝再生現象のin vivoモデル系として、70%部分肝切除ラットを用いて、肝再生を促す薬物の探索などを行ってきた。一連の研究の中で、アスコルビン酸2グルコシド(AsA2G)に注目した。我々は、L-アスコルビン酸の安定型誘導体であるAsA2Gによる肝実質細胞の増殖促進作用を、初代培養肝実質細胞を用いたin vitro実験系で証明した。そこで、本研究では、in vivo実験系の70%部分肝切除マウスを用いてAsA2Gによる肝再生促進作用を検討した。【方法】マウス（ddY系、雄性）に70％部分肝切除術を施行し、術直後より、AsA2Gを1日1回腹腔内投与して、術後1-5日目における肝臓の再生割合をcontrol（生理食塩水）群と比較した。また、マウスの門脈より採血し、血清トランスアミナーゼ（AST、ALT）活性値も測定した。【結果及び考察】70％部分肝切除後の肝重量の経時的変化において、control群は術後1日目から肝重量が増加し、術後5日目には切除前の元の肝重量にまで回復した。AsA2G群では、control群よりも早期から肝重量の増加が見受けられ、術後4日目におけるマウス体重10ｇあたりの肝重量は、control群が0.39 gであるのに対し、AsA2G群は0.46 gと、AsA2G投与により、術後4日目で切除する前の元の肝重量まで回復した。一方、AsA2G投与における70％部分肝切除マウスの血清ASTおよびALT活性は、共にcontrol群と大きな差は認められなかった。これらの結果より、AsA2Gは、70%部分肝切除マウスの肝重量を術後早期から有意に増加させたことから、肝再生を促進させることが示された
-
In vivo L-ascorbic acid and L-ascorbic acid 2-glucoside liver regeneration in 70% partially hepatectomized rats.
Event date： 2013.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
Activation of mitogen-activated protein kinase by L-ascorbic acid is stimulated by both alpha1- and beta2-adrenergic agonists in primary cultures of adult rat hepatocytes.
Event date： 2013.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
Signal transduction pathway for L-ascorbic acid- and L-ascorbic acid 2-glucoside-induced DNA synthesis and cell proliferation in primary cultures of adult rat hepatocytes.
Event date： 2013.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
Effects of L-ascorbic acid on insulin-like growth factor-I receptor tyrosine kinase and mitogen-activated protein kinase activity in primary cultured hepatocytes.
Event date： 2013.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
Vitamin C and its analogue-induced DNA synthesis and proliferation in primary cultures of adult rat hepatocytes.
Mitsutoshi Kimura, Hajime Moteki, Masahiko Ogihara
Event date： 2013.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
Activation of extracellular-signal regulated kinase by epidermal growth factor is potentiated by phenylephrine in primary cultures of adult rat hepatocytes
Hajime Moteki, Mitsutoshi Kimura, Masahiko Ogihara
Event date： 2012.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
Accelerating effect of acyclic retinoid NIK-333 on the restoration of liver mass and recovery if liver function in 70% partially hepatectomized rats.
Mitsutoshi Kimura, Hajime Moteki, Makiko Watanabe, Naoto Ishibashi, Shingo Yanagida, Masahiko Ogihara
Event date： 2012.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
ラット初代培養肝実質細胞における血小板由来成長因子によるMAPキナーゼ活性化に対するアドレナリン作動性調節機構の検討
茂木肇、木村光利、荻原政彦
日本薬学会第131年会（静岡） 日本薬学会
Event date： 2011.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：ツインメッセ静岡
【目的】当研究室では、肝再生現象の解明の一端として、いくつかの成長因子（上皮増殖因子：EGF や肝細胞増殖因子：HGF など）の作用を、成熟ラット初代培養肝実質細胞系を用いて検討してきた。その結果、in vivo の正常な状態の肝臓では、きわめて低くしか発現していなかったアドレナリンα２およびβ受容体が、肝実質細胞を上記の成長因子で初代培養することにより発現してくることをはじめて報告した。さらにα１およびβ２作動薬は、単独では、肝実質細胞の増殖に影響を与
えないが、上記の成長因子との共存下では、成長因子の増殖促進作用を増強させることも見出した。しかし、各成長因子のシグナル伝達機構とこれらのアドレナリン受容体作動薬のそれとの関連（cross-talk）についての詳細は不明である。そこでα１受容体応答が肝細胞の増殖を特に強く促進させる血小板由来増殖因子（PDGF）のシグナル伝達機構のどの部分と相互作用をしているのかを、MAP キナーゼ（MAPK）の活性を直接測定することにより、検討した。
【方法】PDGF とα１およびβ２作動薬との共存下における初代培養肝実質細胞のMAPK 活性を、抗リン酸化ERK１、ERK２抗体を用いたWestern blotting 解析法にて測定し、比較検討した。
【結果および考察】初代培養肝実質細胞をPDGF 単独で刺激することにより、培養開始３分後でピークとなる一過性のERK２活性の上昇が発現した。それらはα１作動薬の共存下で増強され、β２作動薬では影響されなかった。一方、α１およびβ２作動薬単独ではMAPK 活性に変化がなかった。これらの結果から、肝実質細胞におけるPDGF の増強シグナルは、MAPK の上流でα１アドレナリン作動性増強を受けていることが示された。 -
Stimulatory effects of glycyrrhizin on liver regeneration in partially hepatectomized rats
Event date： 2007.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
Leucine-induced DNA synthesis and proliferation in primary cultures of adult rat hepatocytes: The involvement of transforming growth factor-α
Event date： 2006.03
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
-
マウス摘出回腸に対するピペリン-シクロデキストリン包接複合体の収縮抑制作用に関する研究
稲垣 友季子、柏葉 希奈美、松本 奈実子、恵沢 敏成、栗原 一樹、茂木 肇、荻原 政彦、井上 裕、木村 光利
第64回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2020.09
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：オンライン
【目的】胡椒に含まれるピペリン（PP）は、腸管の蠕動運動を抑制するとして、過敏性腸症候群などの新しい治療薬として期待されている。しかし、PPは難溶性のため、製剤的な工夫が必要である。水への溶解性を高める方法の一つにシクロデキストリン(CD)を用いた包接が挙げられる。CDは、構成するグルコース分子数に応じて、6つのα型、7つのβ型、8つのγ型に分類することができる。本研究では、CDにより包接されたPPが及ぼす腸管収縮抑制作用について、その影響を検討するため、腸管マグヌス法を用いて検証した。
【方法】ddY雄性マウスから摘出した回腸をタイロード液が入ったオルガンバス内に懸垂し、カルバコールで回腸を刺激した。その後、PPやその包接体を添加し、回腸収縮高を測定した。なお、PPの各包接化合物は混合粉砕法(GM)および共沈法(CP)により調製した。
【結果および考察】GM により包接されたPP-CDの腸管収縮抑制率はそれぞれα型が36％、β型が32％、γ型が28％とどれも有意な抑制を示した。更に、α型においてCPにより包接されたPPの抑制率は、62％とGMよりも顕著な上昇が認められた。これにより、PPのCD包接には、グルコース分子数が少ないα型が適していると考えれる。 -
ミグリトール-シクロデキストリン包接化合物の血糖上昇抑制効果に関する検討
田中優弥、栗原一樹、内藤浩太、茂木肇、荻原政彦、木村光利
第62回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2018.09
Language：English Presentation type：Poster presentation
Venue：帝京平成大学
【背景・目的】臨床では、血糖上昇抑制薬としてα-グルコシダーゼ阻害薬のミグリトール(miglitol : 以下MTと略す)が、主に食後高血糖を改善する目的で用いられる。投与されたMTの大部分は小腸上部で吸収されるため、小腸下部でのα-グルコシダーゼ阻害作用は減弱する。そのため、食後血糖値推移のピークが現れる時間を遅らせるという特徴を持つ。
シクロデキストリン(cyclodextrin、以下CDと略す)は、複数のグルコースがα-1,4結合した環状のオリゴ糖であり、その空洞中に様々な分子を取り込むことで包接化合物を形成することができる。CDには、結合するグルコース数の違いからα-CD、β-CD、γ-CDなどが存在し、構造の違いから消化性や水溶性などの物性が異なる。α-CDは、多糖類やオリゴ糖類による血糖上昇を抑制する作用があり、糖として腸管から吸収されることはない。一方γ-CDは、α-アミラーゼによって分解され、グルコースとして小腸から吸収されることが知られている。
上記の背景から、本研究ではマウスに対するin vivo経口糖負荷試験を行い、α-CDおよびγ-CD単独並びに包接されたMTが糖負荷による血糖値の変動に与える影響について検討した。
【方法】一晩絶食させたddYマウスにスクロースと各薬物(MT、α-CD、γ-CD、包接化合物)の混合液を経口投与し、投与直後から180分まで経時的に尾静脈から採血し、血糖値を測定した。
【結果・考察】今回の研究結果では、低用量のMT(3 mg/kg)をα-CDで包接することで、高用量のMT(10 mg/kg)単独とほぼ同等な血糖上昇抑制作用が得られた。この結果から、MTの投与量が減量でき、肝、腎機能が低下している患者への投与におけるリスクを減少させることが期待できる。一方、γ-CDを用いた実験では、包接型(MT/γ-CD)は、MT単独群と同様に血糖値ピーク時間をcontrol(スクロース単独投与)群よりも後方に移動させたが、MT単独群と比較し、血糖値に明らかな差は認められなかった。このことから、包接型(MT/γ-CD)は、投与後、γ-CDが速やかに分解されることで、MTの包接による徐放効果が得られなかったのではないかと考えられる。 -
オキセサゼイン-γシクロデキストリン抱接化合物のマウス摘出回腸に対する収縮抑制作用に関する研究
金井 里紗、茂木 肇、木村 光利、井上 裕、金本 郁男、荻原 政彦
第59回日本薬学会関東支部大会 日本薬学会関東支部
Event date： 2015.09
Language：Japanese Presentation type：Poster presentation
Venue：日本大学薬学部
【目的】オキセサゼイン(OXZ)は、過敏性腸症候群などに用いられる局所麻酔薬である。その作用はプロカインの4000倍と高力価であるが、欠点として水に難溶である。水への溶解性を高める方法の一つにγシクロデキストリン(γCD)を用いた包接が挙げられる。OXZは、γCDと抱接化合物を形成し、体内に入るとミセル化され吸収される。また、しかし、OXZ-γCD包接化合物による実際の腸管に対する作用は、未だ証明されていない。そこで、本研究では、マグヌス法を用いて、Ach及びBa誘発腸管収縮反応に対するOXZ-γCD抱接化合物の効果を検討した。
【方法】一昼夜絶食させたddy雄性マウスから摘出した回腸を標本として、それをタイロード液が入ったオルガンバス内に懸垂し、Ba2+及びAChで回腸を刺激した。その後、被験薬を添加し、回腸収縮高を測定した。被験薬は各包接化合物調整法別(共沈法(CP)、混合粉砕法(GM)、物理的混合(PM))の溶出試験により得られた溶出液を使用した。
【結果・考察】Ba2+に誘発した回腸収縮反応は、CP、PM、GP共に溶出時間に依存して抑制が見受けられ、特にCPでは顕著であり、溶出時間30分において収縮率が30％まで有意に低下した。この反応はAChによる回腸収縮反応でも同様な傾向が認められたが、包接化合物の収縮抑制効果はBa2+刺激の方が強かった。Ba2+は細胞内Ca2+濃度を上昇させ、平滑筋の収縮を促進するといわれており、OXZは直接細胞内のCa2+流入を抑制していることが考えられる。