Scientific Research Funds Acquisition Results -
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The effect of prophylactic supplementation of insufficient micronutrients for cognitive impairment in Japanese senile.
Grant number：17K01866 2017.04 - 2021.03
Japan Society for the Promotion of Science Grants-in-Aid for Scientific Research Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Kasono Keizo
Grant amount：\4810000 （ Direct Cost: \3700000 、 Indirect Cost：\1110000 ）
Preventive effects on cognitive decline in elderly peoples can be expected by supplementation of micronutrients.
１．ADAS-Jcog is useful tool for early detection of cognitive decline in elderly peoples：Correlationship between age and ths score of ADAS-Jcog is higher than those of HDS-R or MMSE. Then ADAS-Jcog is useful tool for early detection of cognitive decline in elderly peoples.２．Preventive effects on cognitive decline in elderly peoples can be expected by supplementation of micronutrients：The cognitive decline defined by HDS-R or ADAS-Jcog was inhibited significantly in the male Tezon group compared with the male control group. However, the cognitive decline was not inhibited in the female Tezon group compared with the female control group. -
The investigations of the effects of fatty acids consumption or direct administration on the functions of cardiovascular system.
Grant number：26350904 2014.04 - 2017.03
Japan Society for the Promotion of Science Grants-in-Aid for Scientific Research Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Keizo Kasono
Grant amount：\4810000 （ Direct Cost: \3700000 、 Indirect Cost：\1110000 ）
<1> The administration of palmitoleic acid (POA) for 2 weeks improved the insulin resistance and reduced the plasma glucose levels in diabetic model mice (KKA-y). It was speculated that the administration of POA compensatory increased the relaxation response induced by PPAR-δ.<2> Eicosapentaenoic acid (EPA) dose-dependently decreased the up-regulated protein levels of VCAM-1 and ICAM-1 induced by TNF-α in human aortic endothelial cells.<3> It is speculated that fish oil supplementation reduces the cardiovascular loading induced by increase of Ht during hypoxic training without blunting the improvement of endurance performance.
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tudy of therapeutic effect of sodium nitrite on crush syndrome
Grant number：22592021 2010 - 2012
Japan Society for the Promotion of Science Grants-in-Aid for Scientific Research Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
KOBAYASHI Jun, OHTAKE Kazuo, MURATA Isamu
Grant amount：\3640000 （ Direct Cost: \2800000 、 Indirect Cost：\840000 ）
We developed crush syndrome (CS) rat model to evaluate the therapeutic effect of nitrite on crush syndrome. Intraperitoneal single injection of nitrite improved survival rate of this CS model from 25% to 64%, furthermore combined therapy of continuous infusion of nitrite with conventional therapies including massive fluid infusion and correction of acidosis resulted in 100% survival rate. This might be due to the tissue protective effect of nitrite-derived nitric oxide (NO) against ischemia/reperfusion injury. A 100% survival rate was also achieved by the treatment of the CS rat with single injection of dexamethasone through a mechanism involving NO production in the injured skeletal muscle．These results provide not only a new protective mechanism against ischemia/reperfusion injury in this syndrome, but also a simple and promising drug therapy especially useful in the field of disasters
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The role of neuronal and inducible NOS in the regulation of intestinal apoptosis in fasting and refeeding rat
Grant number：22591492 2010 - 2012
Japan Society for the Promotion of Science Grants-in-Aid for Scientific Research Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
UCHIDA Hiroyuki, OTAKE Kazuo
Grant amount：\3770000 （ Direct Cost: \2900000 、 Indirect Cost：\870000 ）
To investigate the change and role of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and neuronal nitric oxide synthase (nNOS) on decreasing intestinal apoptosis of refeeding after fasting in rats and to define whether the recovery of the intestinal mucosa atrophy by refeeding is associated with the levels of nitric oxide synthases (NOSs) in the jejunum. These results suggest that nNOS-involved control might be present in the regulation of iNOS activity and its-mediated apoptosis in fasting and refeeding.
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Effect of nitorosylated- and phosphorylated-RKIP on cell-proliferation signal in gastric cancer cells
Grant number：20790505 2008 - 2009
Japan Society for the Promotion of Science Grants-in-Aid for Scientific Research Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
OHTAKE Kazuo
Grant amount：\4160000 （ Direct Cost: \3200000 、 Indirect Cost：\960000 ）
The purpose of the current study is to evaluate the effect of nitorosylated- and phosphorylated-RKIP (Raf kinase inhibitor protein) on cell-proliferation signal in human gastric cancer (AGS) cells. RKIP-nitrosylation was significant reduction in the phophorylation level of RKIP in AGS cells. On the other hand, cell proliferation signal was up-regulated by an expressive increase in nitrosylation level of RKIP.
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絶食時の廃用性腸管萎縮における一酸化窒素の役割に関する研究
Grant number：19659347 2007 - 2008
日本学術振興会 科学研究費助成事業 萌芽研究
内田 博之, 大竹 一男, 小林 順
Grant amount：\3300000 （ Direct Cost: \3300000 ）
【目的】誘導型NO合成酵素(iNOS)阻害剤により腸管粘膜萎縮が軽減し、絶食による初期の腸管粘膜萎縮にも、iNOS由来NOが関与することを推測した。そこで、本年度は、絶食による初期の腸管粘膜萎縮のメカニズムを各種遺伝子発現の観点から明らかすることを目的とする。【方法】Wistar雄性9週齢ラットをそれぞれ生理食塩水(SA)投与群とiNOS選択的阻害剤aminoguanidine(AG)投与群に分け、絶食時間を0、24、48、60および72時間とした。絶食後ラットを解剖し空腸を摘出し、病理組織評価、NO2-測定、さらにiNOS、TNF-αおよびINF-γのmRNA発現量を測定した。【結果】SA投与群に比べてAG投与群は、48時間以降において絶食に伴う腸粘膜高の短縮が有意に軽減され、そしてアポトーシス陽性細胞割合の低下が観察された。また、48時間以降において絶食に伴うNO2-濃度の増加も示された。さらに、iNOSのmRNA発現量は絶食時間に伴い有意に増加し、これらの増加はAG投与群で有意に抑制された。INF-γのmRNA発現量は絶食時問に伴い有意に増加し、これらの増加はAG投与群で有意に抑制された。TNF-αのmRNA発現量は72時間絶食で有意に増加し、AG投与群で有意に抑制された。【考察】AGの投与により絶食ラットの空腸において、腸粘膜高の短縮軽減、アポトーシスの抑制、NO2-濃度の増加抑制、iNOS、TNF-αおよびINF-γのmRNA発現量の増加抑制が確認された。これらのことより腸管粘膜萎縮は、絶食によって発現が増加したINF-γが、iNOSを誘導し、それに伴いNOが産生し、アポトーシスが起こる。さらにアポトーシスが進むとTNF-αの発現が増し、更なる炎症作用が誘導されるメカニズムが示唆された。
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マウス胃液及び胃粘膜上皮細胞におけるニトロソ化たん白質の網羅的解析
Grant number：16790391 2004 - 2005
日本学術振興会 科学研究費助成事業 若手研究(B)
大竹 一男
Grant amount：\2900000 （ Direct Cost: \2900000 ）
一酸化窒素(NO)は、L-アルギニンからNO合成酵素(NOS)によって内因的に産生されるが、もう一つの経路として、野菜などに多量に含まれる硝酸塩や亜硝酸塩の摂取によって、外因的に胃内での酸性、還元的環境下で化学的にNOに変換され胃もしくは全身に供給される。胃におけるNOは、感染防御や局所血流の維持だけでなく、胃酸分泌、粘液分泌、重炭酸イオン分泌の制御等、胃の多彩な生理作用に非常に重要な役割を果たすことが知られている。加えて、NOは全身循環血液中において血管拡張作用、血小板凝集抑制作用、抗アテローム性動脈硬化など血液循環動態の本質的役割を果たしていることも知られている。近年、シグナリング分子としてのNOの役割に関心が注がれてきている。特にカスパーゼ系酵素やある種のイオンチャネル、リアノジンレセプターなどの機能性たん白質は、その構造中のスルフホドリル基(-SH基)がNO関連物質(N_2O_3やニトロソニウムイオン)によってS-ニトロソ化(-SNO)され、その機能が変化すること、更に、たん白質のS-ニトロソ化反応は、翻訳後修飾の代表であるリン酸化反応と連動・拮抗しながら生体の恒常性の維持を担うことも推察されてきている。
そこで本研究では、上述した胃の様々な生理機能と上皮細胞におけるニトロソ化たん白質との関連性を評価するためのデータベースを構築するために(1)胃でのニトロソ化たん白質の検出(2)外因的NO供給源として亜硝酸塩をマウスに投与したときの胃粘膜ニトロソ化たん白質の質的、量的変化(3)胃粘膜ニトロソ化たん白質の分離並びにプロテオーム解析を行った。
その結果、(1)瞬間凍結剥離法によってマウス胃粘膜と筋層を分離し、胃粘膜ニトロソ化たん白質の検出を、Jaffreyら(Nat Cell Biol.3:193-7,2001)の報告したビオチンスイッチアッセイ(若干変更)にて検出できた。(2)本法を用いて、マウスに亜硝酸塩を経口投与させた後の胃粘膜ニトロソ化たん白質をウエスタンブロッティング法にて定量的に評価すると、亜硝酸塩の投与量に依存して180,80,38,32,4kDaの分子量のニトロソ化たん白質が顕著に増加することを示した。加えて、これら分子量以外のたん白質も亜硝酸塩の摂取量に依存してニトロソ化されることも示した。(3)これらニトロソ化たん白質を網羅的に同定するために、胃粘膜ライセートにNOドナーであるニトロソグルタチオン(GSNO)を加え、可能な限りニトロソ化した後、ビオチンスイッチアッセイにてニトロソ化たん白質を標識し、ストレプトアビジンゲルカラムにて精製した後、二次元電気泳動にて、ニトロソ化たん白質を分離した。その結果、GSNOを加えていないサンプルよりもGSNOを加えたサンプル方が、顕著に30以上のニトロソ化たん白質が銀染色法によって検出された。ゲルスポットを切り出し、脱色後、トリプシンにて酵素消化し、脱塩したサンプルをMALDI-TOF MASSにてフィンガーマスプリンティングを行った結果、現在までのところ、比較的量の多いハウスキーピングたん白質のみが同定できた。今後は、検出された全てのニトロソ化たん白質の同定を行うことが残されている。